Azay-Mycobactéries

PROCEDURE Identification par amplification génique

MO-BM-002 Rév A

Sommaire

 

I - Objet

II - Recommandations générales

III - Méthodologie

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I - Objet

 

Ce mode opératoire a pour objet de décrire une technique de détection rapide de la résistance des mycobactéries du complexe tuberculosis à la rifampicine.

 

 

II - Recommandations générales

 

Nature des prélèvements testés

Ce test peut être pratiqué directement à partir d'une culture de Mycobacterium tuberculosis ou du complexe tuberculosis obtenue soit en milieu solide, soit en milieu liquide. Il ne mentionne aucune recommandation concernant l'âge de la culture.

L'efficacité de ce test n'a pas été démontrée pour une application directe à partir des prélèvements.

 

Précautions d'hygiène et sécurité (cf. PR-HS-001 et PR-HS-002)

 

Contrôles de Qualité (cf. PR-CQ-002)

 

 

III - Méthodologie

Une seule technique est actuellement commercialisée par les laboratoires Innogenetic, c'est la technique Inno-Lipa Rif TB.

Les résultats donnés par le test Inno-Lipa Rif TB doivent être confirmés par un test phénotypique de sensibilité à la rifampicine. (MO-MYC-006).

 

 1 - Principe

Le principe du test repose sur l'amplification par PCR de la région du gène rpo B dans laquelle surviennent les mutations qui entraînent la résistance de la souche à la rifampicine. En même temps que se réalise l'amplification, l'amplicon subit une biotinylation. L'hybridation du produit d'amplification avec des sondes immobilisées sur un support de nitrocellulose est révélée par réaction de la biotine avec la streptavidine couplée à la phosphatase alcaline.

 

 2 - Mode opératoire

Se reférer aux fiches techniques du kit du fabricant jointes en annexes du document.