Azay-Mycobactéries

PROCEDURE Hygiène-sécurité

PR-HS-002 Rév A

Sommaire

 

I - Objet

II - Précautions générales

III - Précautions particulières au laboratoire de biologie moléculaire

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 I - Objet

 La présente procédure a pour objet de détailler les précautions d'Hygiéne et de Sécurité à prendre lors du traitement des prélèvements par des techniques de Biologie Moléculaire.

 

 

II - Précautions générales Cf. procédure générale d'Hygiène et de Sécurité PR-HS-001.

 

 

III - Précautions particulières au laboratoire de Biologie Moléculaire

Les précautions de manipulation en biologie moléculaire sont variables et dépendent essentiellement de la procédure du test (amplification d'ADN ou d'ARN, détection manuelle ou automatisée... ).

Toutefois, certaines conditions d'utilisation sont communes à tous les tests d'amplification. Elles concernent :

1 - l'organisation des locaux

2 - le port de blouse et de gants

3 - le matériel utilisé

4 - la décontamination des surfaces

5 - les précautions de manipulation par le technicien

 

 

1 - Organisation des locaux

L'espace de travail comprend au minimum 2 zones bien délimitées; 3 zones distinctes sont recommandées :

Les manipulations doivent s'effectuer selon le principe de la "marche en avant" Elles commencent de la zone propre (zone 1), sont poursuivies dans la zone de pré-amplification (zone 2) et se terminent dans la zone de post-amplification (zone 3).

 

 2 - Port de blouse et de gants

- Des gants doivent être portés en permanence.

- Ils doivent absolument être changés lors du passage d'une zone à une autre zone.

- Ils doivent être changés au moindre doute de souillure par de l'ADN ou des bactéries.

- Le port d'une blouse (ou surblouse) est obligatoire pour la réalisation du test d'amplification.

- Il est nécessaire d'utiliser 2 blouses différentes, une pour la zone pré-amplification et une pour la zone post-amplification.

- En aucun cas une blouse déjà utilisée en zone post-amplification ne doit retourner en zone pré- amplification.

 

Remarques :

Pour la zone "propre", il est nécessaire d'utiliser une 3ème blouse.

 

 

3 - Matériel utilisé

- Utiliser seulement du matériel de laboratoire à usage unique.

- Chaque zone (zone pré-amplification, zone post-amplification et éventuellement zone "propre") doit posséder son propre matériel (pipette, vortex, centrifugeuse...).

- Ce matériel doit absolument rester dans la zone pour laquelle il a été attribué.

- Le matériel et les appareils doivent être dédiés à une seule activité, ils ne doivent ni servir à d'autres activités, ni être transportés d'une zone à une autre.

- Le matériel et les appareils utilisés pour la préparation des réactifs ne doivent pas servir à la préparation des échantillons, ni au transfert ou au traitement d'ADN amplifié ou d'autres sources d'ADN cible.

- Le matériel et les appareils de postamplification doivent toujours rester dans la zone de postamplification.

 

Ne jamais transporter du matériel de la zone 2 vers la zone 1.

 

- Il est obligatoire d'utiliser des micropipettes à embouts à filtre ou à déplacement positif.

- Lors du transfert du lysat des tubes de lyse aux tubes d'amplification, des cônes extra longs doivent être utilisés. Il faut changer de cône entre chaque étape. Eviter de passer au-dessus des autres tubes du portoir. Les cônes usagés doivent être immédiatement jetés dans un container approprié.

- Les étapes de distribution doivent être effectuées soigneusement pour éviter toute contamination. Pour la distribution des réactifs, lors de l'utilisation de pipettes répétitives, éviter de toucher les parois des tubes avec l'embout du cône afin de minimiser les risques de contamination d'un tube à l'autre. L'écoulement du réactif doit être effectué contre la paroi du tube pour éviter les éclaboussures.

- Les cartes de protection ou les bouchons doivent être jetés dans un container approprié immédiatement après leur retrait. Ne jamais réutiliser les cartes de protection ou les bouchons. Les cartes de protection doivent être fermement appliquées sur le haut des tubes pendant la réaction.

L'utilisation des blocs chauffants secs est préférable à celle des bains-marie humides.

- Ne pas couvrir le bain marie pendant les incubations. (la condensation sur le couvercle peut être une source de contamination).

 

 

4 - Décontamination des surfaces

Afin de limiter la contamination des surfaces par les acides nucléiques, il est conseillé de nettoyer régulièrement les surfaces et l'équipement utilisé avec une solution d'eau de javel à 3°, de la soude à 0.1 N ou de l'acide chlorhydrique à 0.1 N. Pour limiter l'effet corrosif de ces produits, ce nettoyage sera suivi d'un rincage à l'eau.

 

Remarques :

Il est possible de préserver les surfaces utilisées en recouvrant celles-ci de papier (ex : papier aluminium ) lors de chaque manipulation, le papier étant jeté sitôt la manipulation terminée.

Il est possible également d'utiliser le papier aluminium pour envelopper des réactifs ou des portoirs de tubes conservés à température ambiante ou à +4°C.

Après lecture des tubes, les placer dans un récipient contenant de l'eau de Javel afin d'éviter une contamination de l'environnement du laboratoire avec les amplicons.

 

5 - Précautions de manipulation concernant le technicien

Tous les échantillons doivent être manipulés comme s'ils étaient infectieux. Le technicien doit réaliser toutes les manipulations avec précaution afin d'éviter la contamination des échantillons, des réactifs ainsi que celle des surfaces et du matériel.

Certains réactifs (cf. fiches techniques en annexes) contiennent de l'azide de sodium risquant de former, par réaction avec le plomb ou le cuivre des canalisations, des azides métalliques explosifs. Après utilisation de ces réactifs, il convient de rincer abondamment à l'eau les canalisations dans lesquelles ont été déversées les solutions contenant de l'azide de sodium.

Pour décontaminer les vieux siphons dans lesquels on soupçonne une accumulation d'azides, il est recommandé de procéder comme suit: (1) A l'aide d'un tuyau en caoutchouc ou en plastique, siphonner le liquide contenu dans le siphon, (2) le remplir avec une solution d'hydroxyde de sodium à 10%, (3) laisser reposer 16 heures et (4) rincer abondamment à l'eau

Eviter l'inhalation de vapeurs, l'ingestion et le contact de tout réactif avec la peau et les muqueuses, En cas de contact avec la peau, laver soigneusement au savon et à l'eau, et consulter immédiatement un médecin.

Diluer avant de sécher si des réactifs se renversent sur des surfaces de travail.