Sommaire

 I - Objet

II - Réactifs

III - Méthodologie

IV - Remarques

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I - Objet

Cette procédure a pour objet de détailler les modalités de préparation technique des prélèvements destinés à la recherche des mycobactéries avant leur manipulation.

 

II - Réactifs

Se reporter en annexes du document MO-MYC-003.

 

III - Méthodologie

- Préparer pour chaque prélèvement

- 1 lame

- Tube(s) de milieux de culture (MO-MYC-003)

- 1 flacon Bactec® ou autre milieu (MO-MYC-003)

- Avant leur manipulation, les prélèvements sont étiquetés

1ère étiquette sur l'ordonnance

2ème, sur le pot de prélèvement

3ème, sur le flacon de décontamination

4ème, sur le flacon Bactec ou autre milieu

5ème à n ième étiquette, sur les tubes de milieux de culture

- Classer les prélèvements par ordre de N° d'enregistrement.

 

IV - Remarques

Si possible, garder pendant 1 semaine, une fraction du prélèvement originel à +4°C pour une autre culture en cas de contaminations de la première culture, ou redécontaminer le premier culot.

En règle générale, les selles et les écouvillons sont à éviter. Cependant certains prélèvements de pus sont réalisés à l'écouvillon. Dans ce cas, on exprimera le coton dans 1 ml d'eau physiologique stérile ou de milieu de Dubos.

Selon leur consistance, les prélèvements extrapulmonaires non contaminés s'ils sont fluides, sont ensemencés directement ou après centrifugation à 3000 g pendant 15 mn (LCR, liquides d'épanchement...); plus épais, ils sont dilués dans l'eau stérile (environ au 1/5) et ensemencés.

Si le volume le permet et selon les caractéristiques du prélèvement, il est possible de multiplier les ensemencements. Exemple : ensemencement du même produit directement et après décontamination, ou ensemencement du caillot de fibrine présent dans le prélèvement.

Pour les prélèvements de biopsies et pièces anatomiques

- Découper la biopsie à l'aide de pinces et de ciseaux stériles de manière à ce que les morceaux soient les plus petits possibles.

- Broyer dans un peu d'eau distillée stérile. Les systèmes de broyage sont divers: Ultraturax, T25, Ika, labotechnic, Janke et Kunkel, type Virtis ou Stomacher, Potter, mortier et sable.......

- Centrifuger le broyat à 3000 g pendant 15 mn.

- Au culot de centrifugation, ajouter 0,5 à 1 ml de milieu de Dubos, et laisser en contact pendant 1 heure.

Les instruments souillés sont décontaminés dans une solution désinfectante efficace sur les mycobactéries (cf. PR-HS-001).