LEGIONELLA / LEGIONELLOSE
1 - Introduction
Cette bactérie peu isolée dans notre pratique quotidienne est, cependant, régulièrement à l'ordre du jour en France.
1 - Introduction
Cette bactérie peu isolée dans notre pratique quotidienne est, cependant, régulièrement à l'ordre du jour en France.
2 - Epidémiologie
Il s'agit d'histoires d'eau faisant couler........ quelques interrrogations sur divers aspects épidémiologiques
Il s'agit d'histoires d'eau faisant couler........ quelques interrrogations sur divers aspects épidémiologiques
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3 - Incidence
Le document récent du BEH (Mai 1997) apporte les réponses à diverses questions que nous nous posons
A titre d'exemples :
* cas diagnostiqués en France évalué à 530 (1995) incidence de 0,9/100 000.
nombre réel de cas estimé à 2000 à 3000 / an
A titre d'exemples :
* cas diagnostiqués en France évalué à 530 (1995) incidence de 0,9/100 000.
nombre réel de cas estimé à 2000 à 3000 / an
* proportion parmi les pneumopathies communautaires : 0,5 - 5%.
* prévalence des anticorps anti-Lp1 (> 256) : 1-16% ds population adulte
4 - Diagnostic
DIAGNOSTIC : SENSIBILITÉ ET SPÉCIFICITÉ SELON LA METHODE
BEH, 1997, N°20-22
* prévalence des anticorps anti-Lp1 (> 256) : 1-16% ds population adulte
4 - Diagnostic
DIAGNOSTIC : SENSIBILITÉ ET SPÉCIFICITÉ SELON LA METHODE
BEH, 1997, N°20-22
4-1/ Immunofluorescence directe (spécifique de Lp1)
sécrétions bronchiques : lavage broncho-alvéolaire ou LBA, brossage
parenchyme pulmonaire après biopsie
Faible sensibilité : seuil à 104 cfu/ml
sécrétions bronchiques : lavage broncho-alvéolaire ou LBA, brossage
parenchyme pulmonaire après biopsie
Faible sensibilité : seuil à 104 cfu/ml
4-2/ Culture
Le prélèvement pur, et dilué à 10-2 et 10-3 en eau distillée doit être examiné.
Hémoculture : si sub-cultivée sur milieu BCYE (+ dans 10 à 30% des cas)
Culture (suite):
Boites examinées à la loupe binoculaire tous les jours (15 jours)
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Décontaminer les prélèvements pluri-microbiens par un tampon HCl - KCl à pH 2,2
Ensemencer 3 BCYE-alpha simple (BCYE-alpha pour Buffered Charcoal Yeast Extract + acide alpha-céto-glutarique) Ensemencer aussi 3 BCYE-alpha sélectif : vancomycine, céfamandole, polymyxine B, anisomycine. Incuber à 35°C sous 2,5% de CO2, |
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Le prélèvement pur, et dilué à 10-2 et 10-3 en eau distillée doit être examiné.
Hémoculture : si sub-cultivée sur milieu BCYE (+ dans 10 à 30% des cas)
Culture (suite):
Boites examinées à la loupe binoculaire tous les jours (15 jours)
Les cultures positives montrent l'aspect suivant des colonies :
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Identification rapide
bacille à Gram négatif
bacille à Gram négatif
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Quels sont les principaux caractères à rechercher ?
exigeant en cystine et en fer: culture positive sur BCYE + absence de culture sur gélose au sang frais ou gélose chocolat poussant mieux en présence de 2,5-5 % de CO2 aspect typique de culture sur BCYE-alpha absence de culture sur BCYE-alpha sans L-cystéine (sauf L. jordanis et L. oakridgensis). aérobie strict catalase +, oxydase variable nitrates + uréase + acidification des hydrates de carbone, |
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Identification (suite)
Envoyer ensuite au Centre de Référence
4-3 / Détection d'antigènes solubles (L. pneumophila)
4-3-1 Test unitaire
4-3-1 Test unitaire
dans les urines et par une méthode ELISA spécifique du sérogroupe 1
NOWTM BINAX Legionella
Introduction
Test pour la détection qualitative de l'antigène de Legionella pneumophila sérogroupe 1 (Lp1) dans les urines de patients présentant des symptômes de pneumonie. Il aide au diagnostic présomptif des infections à Legionella en parallèle avec la culture ou d'autres tests.
Principe
C'est un test immunochromatographique sur membrane.
. Des anticorps (Ac) de lapin anti-Legionella pneumophila sérogroupe 1 sont absorbés sur la membrane au niveau de la ligne patient.
. Une deuxième ligne d'Ac est fixée au niveau de la ligne contrôle : IgG de chèvre anti-lapin.
Des Ac de lapin anti-Lpl marqués par des particules permettant de visualiser le résultat sont présents sous forme déshydratée sur un support inerte.
La bande test et l'emplacement destiné à l'écouvillon sont montés sur deux plaquettes cartonnées différentes, reliées par une charnière.
Procédure
L'écouvillon doit être plongé dans l'urine à tester, retiré, puis inséré dans la carte-test. On ajoute ensuite le réactif A contenu dans le flacon compte-gouttes, puis l'on ferme la carte-test pour mettre en contact l'échantillon et la bande-test.
Les antigènes (Ag) de L. pneumophila sérogroupe 1 présents dans l'urine se lient avec les anticorps marqués et sont capturés par les anticorps anti-Lp1 fixés au niveau de la ligne patient.
Les IgG de chèvre anti-lapin immobilisés se lient avec les anticorps marqués pour former une ligne de contrôle.
Il est rendu en orientation et sera confirmé par les autres techniques disponibles pour un diagnostic de legionnellose (sérologie J0 et J15, culture sur prélèvement pulmonaire, et antigène urinaire en Elisa).
Avantages :
précose (dès le début des signes), simple (ECBU), rapide (en + 15 minutes), diagnostic tardif (> 2 mois), même après un traitement antibiotique adapté. Bonne valeur prédictive.
Inconvenients :
Ce test ne détecte pas les autres sérogroupes de L. pneumophila, ni les autres espèces de Legionella.
Un test négatif en 15 minutes indique l'absence d'Ag de L. pneumophila sérogroupe 1 dans l'urine.
Il est recommandé d'associer la recherche d'antigène à la culture pour les cas de pneumopathies.
D'autres prélèvements (plasma, sérum, autres liquides biologiques) peuvent contenir des antigènes de Legionella, mais ils n'ont pas été testés.
4-4/ Sérologie
Test pour la détection qualitative de l'antigène de Legionella pneumophila sérogroupe 1 (Lp1) dans les urines de patients présentant des symptômes de pneumonie. Il aide au diagnostic présomptif des infections à Legionella en parallèle avec la culture ou d'autres tests.
Principe
C'est un test immunochromatographique sur membrane.
. Des anticorps (Ac) de lapin anti-Legionella pneumophila sérogroupe 1 sont absorbés sur la membrane au niveau de la ligne patient.
. Une deuxième ligne d'Ac est fixée au niveau de la ligne contrôle : IgG de chèvre anti-lapin.
Des Ac de lapin anti-Lpl marqués par des particules permettant de visualiser le résultat sont présents sous forme déshydratée sur un support inerte.
La bande test et l'emplacement destiné à l'écouvillon sont montés sur deux plaquettes cartonnées différentes, reliées par une charnière.
Procédure
L'écouvillon doit être plongé dans l'urine à tester, retiré, puis inséré dans la carte-test. On ajoute ensuite le réactif A contenu dans le flacon compte-gouttes, puis l'on ferme la carte-test pour mettre en contact l'échantillon et la bande-test.
Les antigènes (Ag) de L. pneumophila sérogroupe 1 présents dans l'urine se lient avec les anticorps marqués et sont capturés par les anticorps anti-Lp1 fixés au niveau de la ligne patient.
Les IgG de chèvre anti-lapin immobilisés se lient avec les anticorps marqués pour former une ligne de contrôle.
Il est rendu en orientation et sera confirmé par les autres techniques disponibles pour un diagnostic de legionnellose (sérologie J0 et J15, culture sur prélèvement pulmonaire, et antigène urinaire en Elisa).
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Avantages :
précose (dès le début des signes), simple (ECBU), rapide (en + 15 minutes), diagnostic tardif (> 2 mois), même après un traitement antibiotique adapté. Bonne valeur prédictive.
Inconvenients :
Ce test ne détecte pas les autres sérogroupes de L. pneumophila, ni les autres espèces de Legionella.
Un test négatif en 15 minutes indique l'absence d'Ag de L. pneumophila sérogroupe 1 dans l'urine.
Il est recommandé d'associer la recherche d'antigène à la culture pour les cas de pneumopathies.
D'autres prélèvements (plasma, sérum, autres liquides biologiques) peuvent contenir des antigènes de Legionella, mais ils n'ont pas été testés.
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4-3-2 Test groupé (ELISA)
. laboratoire spécialisé . série . bonne sensibilité |
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4-4/ Sérologie
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- Réponse variable selon l'antigène disponible
- Augmentation significative (x 4) des titres d'anticorps - Immunofluorescence indirecte (IFI) - ELISA - Examen à faire dans deux sérums :
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- Fausse réaction positive : Chlamydia, Mycoplasma, Coxiella......
- Spécificité d'un titre élevé isolé médiocre
E/ Détection par PCR
- méthode de détection rapide
- au stade du développement
- non utilisée en routine
5 - Antibiogramme
non nécessaire, d'autant que le milieu BCYE alpha est inapproprié
non nécessaire, d'autant que le milieu BCYE alpha est inapproprié
6 - Autres recherches
