Le choléra, maladie infectieuse diarrhéique à caractère le plus souvent épidémique se manifeste par une violente diarrhée (dix à vingt selles "eau de riz" par jour) accompagnée de vomissements après une incubation variant de quelques heures à quelques jours. La déshydratation peut atteindre 15 litres d'eau / jour, elle est ainsi responsable de la gravité de la maladie. |
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C'est une maladie grave pour l'individu et pour la collectivité. D'une part la mortalité est importante chez les patients non traités, et pour la propagation rapide au sein d'une population (épidémie).
Pour en savoir plus : http://www.chu-rouen.fr/ssf/pathol/cholera.html
Le rôle du laboratoire de bactériologie est capital, en particulier dans le diagnostic de cas isolés dits "d'importation", exceptionnellement lors de cas autochtones.
Le diagnostic doit être réaliser avec rigueur et rapidité afin d'éviter une fausse alerte ou un retard dans la détection d'un foyer cholérique.
ATTENTION: Il s'agissait d'une fausse alerte
LE DIAGNOSTIC EST BACTERIOLOGIQUE
Cette recherche ne s'effectue pas en routine, mais lors d'une demande clinique précise
- Prélèvements :
- selles
- vomissements
- eau
- quelquefois aliments.
- Transport des prélèvements, le plus souvent une selle
Une méthode simple consiste à imbiber un morceau de papier absorbant stérile et à le placer dans un récipient stérile en matière plastique à fermeture étanche, contenant quelques gouttes d'eau physiologique stérile qui peut être envoyé au laboratoire à température ambiante.
- Autres moyens de transport : eau peptonée hypersalée alcaline, milieu de transport et d'enrichissement pour vibrions..........
BIEN QU'AGENT BIOLOGIQUE DE LA CLASSE 2, DES MESURES DE SÉCURITÉ SONT A PRENDRE AU LABORATOIRE :
* Manipuler les cultures sous une hotte offrant une protection du manipulateur en cas de projection accidentelle.
* Pas de pipettage à la bouche des cultures et des sérums. Utiliser des pipettes automatiques.
* Désinfecter immédiatement avec de l'eau de Javel, les paillasses ou le sol en cas de projection ou d'éclaboussures à partir de matériel contaminé. Les vibrions sont sensibles à tous les désinfectants usuels.
* Désinfecter la verrerie par autoclavage.
* Placer le matériel contaminé dans un récipient et l'autoclaver.
1/ Examen macroscopique et microscopique
- selles aqueuses, le plus souvent avec un aspect "eau de riz"
- souvent avec présence de bacille à Gram-négatif très mobile (état frais)
- Gram - incurvé ou non
2/ Isolement sans enrichissement
Pousse en 24 h à 37°C sur les milieux usuels avec un aspect caractéristique des colonies
en bris de verre.........
3/ Isolement avec enrichissement
Effectuer une succession de cultures en eau peptonée alcaline (EPA) ou hypersalée alcaline (EPSA) pour sélectionner le vibrion cholérique. Dès qu'un tube est trouble, repiquer dans un nouveau tube d'EPA et isolée sur une gélose nutritive alcaline (GNA) et de type TCBS. Prélever sous la surface de l'eau peptonée, sans remuer le tube.
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Les colonies suspectes isolées sur TCBS (arrondies, bombées et jaunes, car saccharose +) doivent être réisolées sur GNA afin d'effectuer la recherche de l'oxydase et celle d'une agglutination avec les sérums anti-0:1 et anti-0:139.
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4/ Diagnostic présomptif basé sur quelques caractères :
- morphologiques : bacille à Gram-négatif très mobile (état frais) incurvé ou non (Gram) monotriche (Leifson)
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- culturaux : bien noter l'aspect des colonies comme sur GNA: rondes, de taille moyenne, environ 2 mm de diamètre après 18 heures de culture, translucides bleutées à bords réguliers. Mais l'aspect des colonies varie beaucoup en fonction de la peptone ensemencée.
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- biochimiques : oxydase + (à proscrire à partir d'une culture sur TCBS)
Les galeries API System 20E et 20NE sont un appoint important au diagnostic rapide.
API System 20E
API System 20NE
On notera l'aspect particulier de la croissance en milieu liquide tel un bouillon de type eau peptonée.
- immunologiques : recherche de l'agglutination sur lame avec un immunsérum anti-O1. L'agglutination est rapide (< 2 min.), fine et granulaire. Contrôler avec un témoin en eau physiologique, car existence de souches auto-agglutinables.
Le vibrion cholérique peut appartenir aussi au sérogroupe O/139.
En l'absence de sérum commercialisé, toute souche suspecte sera adressée au Centre National de Référence.
5/ Autres étapes
- Déclaration aux autorités sanitaires qui prendront les mesures nécessaires.
- Envoi de la souche, même suspecte, au CNR afin de confirmer le diagnostic bactériologique.
6/ Diagnostic biochimique d'espèce par recherche d'autres caractères
7/ Sensibilité aux antibiotiques
L'antibiogramme devra inclure les antibiotiques suivants : amoxicilline, tétracycline, sulfamides, co-trimoxazole.
On n'omettra pas de tester la sensibilité habituelle au O129 (dérivé de ptéridine) sur une gélose de Mueller-Hinton normale (disque). Néanmoins des souches résistantes à cet agent sont de plus en plus souvent isolées.
Cette fiche a été possible avec la collaboration du Professeur P. Berche (UFR Necker-Enfants -Malades).
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