Milieux de culture et ensemencement (MO-MYC-003)

 

 

* Culture possible sur ou dans différents milieux (solide, liquide) :

solide: Milieu de Löwenstein-Jensen, Milieu de Coletsos

liquide: Milieu de Dubos, Youmans, commerciaux

 

 

 

* Culture en milieu solide (Ensemencement classique): l'ensemencement doit être fait au moins sur 4 tubes: 2 milieux de Löwenstein-Jensen, 1 milieu Coletsos et 1 milieu de Löwenstein-Jensen enrichi avec 0,2% de pyruvate.  

 

 

. Culture en milieu solide (Ensemencement classique): Certains prélèvements rares tel liquide de ponction sont centrifugés puis ensemencés directement, à raison de 0,2 ml du culot de prélèvement/tube,

 

 

 

 

. Les prélèvements traités (cf décontamination, MO-MYC-002) après centrifugation sont ensemencés comme précédemment.

 

 

 . Evaporation: Après ensemencements, les tubes non vissés sont incubés en position inclinée à 37°C. L'évaporation de liquide doit être suffisante avant de revisser les tubes (3-6 jours).

 

 

 

 

. Observation des cultures: Les tubes de culture sont gardés au moins 8 semaines à l'étuve à 37°C avant de considérer la culture comme négative. La lecture est faite 1 fois par semaine.

 

 

 

 Un autre système de conservation à l'étuve !

* Cultures en milieu liquide : Il existe plusieurs techniques impliquant des automates de culture avec la technique radiométrique Bactec ® 460 TB (Becton Dickinson), celle de fluorescence de BBL ® MGIT (Mycobacteria Growth Indicator Tube - Becton Dickinson) ou encore le système MB/BacT (Organon). Celles-ci sont de plus en plus utilisées par des laboratoires traitant plus de 7000 cultures par an.  

 

 

 

  . La technique de fluorescence (MGIT) utilise un milieu contenant un sel de ruthénium. émettant une fluorescence d'autant plus vive que la pression d'oxygène est plus faible, suite au métabolisme microbien. La fluorescence qui apparait est proportionnelle au niveau de réduction du milieu. Cette technique peut être manuelle.

 

 

 

 

 . La respirométrie radiométrique Bactec consiste à apprécier la croissance en mesurant la quantité de ¹⁴CO2 libérée par le métabolisme de l'acide palmitique marqué au ¹⁴C présent dans le milieu de culture 7H12 Ensemencer en parallèle un milieu de Löwenstein-Jensen (voir MO-MYC-003). L'antibiogramme peut être réalisé (voir images)

 

 

 

. Le système MB/BacT utilise une méthode de détection évaluant l'évolution de la croissance microbienne par la quantité de CO2 produit (indicateur coloré). Le système de lecture complété d'un équipement informatique déclenche le signal de positivité.

 

 

 

*Hémocultures

 

  . Technique Isolator 10 ®

 

  . Technique radiométrique Bactec ® 460 TB (voir plus haut)

 

 . Technique de fluorescence Bactec® 9240 (voir plus haut)

 

. Système MB/BacT (voir plus haut)

 

. Technique Bactec® 9950