Décontamination des prélèvements (MO-MYC-002)

 

La décontamination des prélèvements contaminés par la flore commensale est une étape préalable indispensable à la mise en culture des mycobactéries. Diverses méthodes de décontamination-fluidification ont été décrites dont la décontamination à la soude à 4 % (méthode de Petroff).

Ces méthodes font intervenir plusieurs étapes. D'abord une étape de décontamination, fluidification des échantillons, suivie d'une étape de neutralisation et enfin la récupération du culot de centrifugation (cf G.B.E.A). 

 

- Etape 1 : La plupart des échantillons (expectorations, tubage gastrique, selles) sont centrifugés pour être concentrés puis le surnageant est délicatement éliminé. Les tubes après fermeture peuvent être désinfectés (présence d'une goutte) par un tampon imbibé d'eau de javel.

 

 

 

 

 

 - Etape 2: Il existe plusieurs types de décontamination des flores. La plus souvent appliquée met en oeuvre la soude pendant une heure à 37°C. Enfin, la neutralisation sera obtenue par adjonction d'une solution neutralisante d'acide.

 

 

 

Après élimination des surnageants, les culots sont traités par de la soude lors et une incubation d'une heure à 37°C.

  

 

 

 

 

- Les échantillons sont alors neutralisés (virage à une goutte) avec la solution d'acide chlorhydrique.

 

 

- Etape 3 : Les prélèvements traités sont centrifugés repris en tampon phosphate et ensemencés, à raison de 0,2 ml du culot de prélèvement/tube: Exemple d'ensemencement classique sur un milieu de Löwenstein-Jensen

 

 

 

 

- Deuxième "décontamination": Lors de culture contaminée (entre 2 et 5 jours), en particulier lors d'examen d'une expectoration chez un patient atteint de mucoviscidose, il est nécessaire de retraiter l'échantillon "décontaminé" conservé à froid (à 4°C) par une solution d'antibiotiques.